¿Cómo se calibran las pipetas?
En los procesos analíticos cuantitativos se deben realizar, entre otras, medidas de masa y de volumen. En un análisis cada una de las medidas está sujeta a variables o factores responsables de que, al repetir el procedimiento de medición de una misma cantidad, no se obtenga siempre el mismo valor numérico.
Para describir la reproducibilidad de las medidas se utiliza el término precisión, que puede definirse como la variabilidad entre los valores numéricos de dos o más medidas o resultados que se han obtenido con un mismo procedimiento. Dicha variabilidad depende directamente del instrumento utilizado ya que éste es uno de los factores que intervienen en el proceso de medición. Por lo tanto, si se espera precisión en los resultados, es necesario que el instrumento permita realizar las medidas en forma precisa.
Sin embargo, la precisión no asegura exactitud. El término exactitud denota la proximidad de una medida a su valor verdadero o aceptado, y puede mejorarse mediante la recalibración.
La verificación de la calibración del equipo volumétrico permite conocer los volúmenes realmente contenidos o liberados por cada aparato, y en general consiste en determinar la masa de un líquido de densidad conocida contenida (o liberada) por éste.
¿Qué son las pipetas?
Se trata de aparatos herméticos con un pistón cargado con un resorte que fuerza el aire fuera de la pipeta al oprimir el botón pulsador de la parte superior de la pipeta. Este botón permite desplazar un volumen conocido y generalmente ajustable de aire de la punta desechable de plástico (tip). El volumen de aire desplazado se puede variar trabando un micrómetro de ajuste, localizado en el frente del dispositivo, o rotando la barra graduada hasta cada tope, según el modelo de pipeta.
Enseguida se introduce la punta desechable dentro del líquido y la presión liberada sobre el botón hace que el líquido sea aspirado por la punta. La punta se coloca contra la pared del vaso recipiente, y se oprime de nuevo el botón pulsador para vaciar completamente la punta.
En el mercado se dispone de numerosas pipetas automáticas para situaciones que requieren la transferencia repetida de un volumen particular. Pueden ser de volumen fijo o de volumen variable. También se dispone de pipetas de microlitro motorizadas, que se controlan por computadora, y una gran variedad de software para que estos dispositivos funcionen como pipetas, distribuidores de volúmenes múltiples, buretas y como medios para diluir muestras.
El intervalo de volúmenes actualmente es muy variado. Existen micropipetas que miden en un rango de volumen de 0.1 a 2.5 µL, con un paso de 0.002µL, hasta macropipetas con un rango de volumen de 500 a 5000µL, con un paso de 5µL a 0.1 mL.
En general los fabricantes entregan con cada pipeta un certificado individual, que documenta los datos de producción y los valores de la calibración primaria.
Las pipetas automáticas de volumen fijo son muy precisas, pero las de volumen variable no lo son tanto. Estas últimas son menos precisas que las aforadas, pero cuando en un análisis se utiliza una pipeta automática de volumen variable habiendo ajustado el volumen requerido y sin variarlo más, su precisión es comparable a una pipeta aforada de clase A.
¿Cómo se manipula una pipeta automática?
Instrucciones para el manejo de una pipeta automática
Ajustar el volumen girando la barra graduada hasta que en la escala aparezca el volumen deseado.
Colocar un tip o punta de plástico en la punta de la pipeta, según sea el caso, haciendo una leve presión para lograr un buen ajuste.
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Oprimir el botón pulsador con el dedo pulgar, hasta el primer tope y sin soltarlo introducir verticalmente la pipeta, hasta que el tip se sumerja de 5 a 10 mm dentro del líquido.
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Liberar lentamente la presión sobre el botón. Después de 2–3 segundos retirar, siempre verticalmente, la pipeta del líquido deslizando la punta contra la pared del recipiente.
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Apoyando la punta contra la pared del recipiente donde se quiere colocar el líquido, presionar lentamente el botón pulsador hasta el primer tope. Después de un segundo, y sin soltar el botón pulsador, terminar de vaciar la pipeta presionando hasta el segundo tope.
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Retirar la pipeta deslizando la punta contra la pared del recipiente.
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Determinación del volumen vertido por la pipeta automática
- Pesar un matraz Erlenmeyer de 100 mL, limpio y seco por fuera y en el cuello, con su correspondiente tapón de goma (m0). Para ello tomarlo con una pinza o banda de papel.
- Anotar la temperatura t del agua destilada con la que se va a trabajar.
- Llenar la pipeta automática con agua destilada y descargarla en el matraz
- Retirar la pipeta.
- Tapar el matraz Erlenmeyer y pesarlo (m1), con las mismas precauciones que la vez anterior.
m1 - mo = m agua, aire, t (masa del agua que vierte la pipeta en el aire, a la temperatura t)
- Repetir la operación vaciando nuevamente la pipeta en el mismo matraz, sin tirar el agua colocada anteriormente. Se obtendrá una nueva masa, m2.
m2 - m1 = m agua, aire, t
- Repetir la operación hasta obtener 10 datos de masa, y hacerles la corrección para obtener V20ºC multiplicándolo por el factor que corresponde a la temperatura de la experiencia, Se corrige por el coeficiente de dilatación del vidrio, pues el volumen de agua succionado por la pipeta automática es el mismo que el volumen de aire retenido en la camisa de vidrio que se encuentra en el interior de la pipeta y por el cual se desplaza el pistón
Tolerancias de las pipetas
Para la mayoría de las pipetas se considera los siguientes errores estos cambian según la marca, modelo y diseño del fabricante.
Volumen Nominal |
µl |
1 |
2 |
5 |
10 |
20 |
50 |
100 |
200 |
500 |
1000 |
2000 |
5000 |
10000 |
Error Sistemático Máximo Permitido |
±µl |
0.05 |
0.08 |
0.125 |
0.12 |
0.2 |
0.5 |
0.8 |
1.6 |
4.0 |
8.0 |
16 |
40 |
60 |
Error aleatorio Máximo Permitido |
±µl |
0.05 |
0.04 |
0.075 |
0.08 |
0.1 |
0.2 |
0.3 |
0.6 |
1.5 |
3.0 |
6.0 |
15.0 |
30.0 |
Proveedores de pipetas automáticas
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