Prueba de esterilidad I

Medios de cultivo y soluciones

La prueba de esterilidad tiene fundamento en la detección de formas viables de microorganismos, en medios de cultivo adecuados para el crecimiento de bacterias, hongos y levaduras que se encuentran como contaminantes en productos estériles.

Recomendaciones especiales para la prueba de esterilidad

Para evitar una contaminación accidental la prueba debe llevarse a cabo en condiciones asépticas por lo que periódicamente se realizará el control ambiental de las áreas de trabajo, así como del equipo y material empleados. Los envases de las muestras deben desinfectarse previamente a su análisis. A los  productos envasados al vació, se les debe introducir aire filtrado a través de algodón estéril. Si el producto tiene diluyente o algún aplicador anexo, también debe cumplir la prueba de esterilidad. Se debe llevar a cabo una prueba en blanco como testigo, paralela a los análisis de las muestras.

Pruebas de esterilidad en medios de cultivo y soluciones

Prepararlos medios de cultivo a partir de medios deshidratados comerciales o preparados en base a sus formulaciones. Ajustar el pH con soluciones 1N de hidróxido de sodio ó 1N de ácido clorhídrico para que después de esterilizar en autoclave se obtenga el valor indicado en cada caso. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.

Medio A. Medio fluido de cioglicolato

Mezclar los ingredientes hasta que estén completamente disueltos en agua, calentar si es necesario. Ajustar el pH, calentar nuevamente sin hervir y filtrar a través de papel filtro humedecido. Añadir la solución de resarsurina de sodio y envasar en tubos adecuados. Esterilizar. El medio presenta coloración rosa superficial por la oxidación del mismo, la cual no debe rebasar la tercera parte del volumen total; si la coloración es mayor, se puede calentar una vez en baño de agua hasta que la coloración desaparezca. Usarse cuando la coloración se reestablezca a la décima parte del volumen total del medio.

Medio B. Medio fluido de tioglicolato con  polisorbato 80

Preparar el medio como lo realiza para el medio A adicionar por cada litro de medio 50mL de polisorbato 80. Esterilizar.

Medio C. Medio Fluido de tioglicolato con penicilanasa

Preparar el medio como se indica en el medio A. A cada tubo de medio estéril  adicionar suficiente penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presenten la muestra.

Medio D. Medio fluido de tioglicolato con polisorbato 80 adicionado de penicilinasa

Preparar el medio como indica medio B. A cada tubo con medio estéril, adicionar suficiente penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Medio E. Caldo soya tripticaseína

Disolver los ingredientes en 500mL de agua, calentando suavemente hasta que la disolución sea completa  y llevar ala aforo a 1000mL. Ajustar el pH, filtrar y envasar en tubos adecuados. Esterilizar.

Medio F. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80

Preparar el medio como se indica en el medio E. Adicionar 5 ml de polisorbato 80 por cada litro de medio.

Medio G. Caldo soya tripticaseína con penicilinasa

Preparar el medio como se indica en Medio E. Adicionar la cantidad suficiente de penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.
Medio H. Caldo soya tripticaseína con polisorbato 80 adicionado de penicilinasa.
Preparar el medio como se indica en medio F. A cada tubo con medio estéril adicionar suficiente penicilinasa estéril para inactivar la penicilina presente en la muestra.

Solución I. Solución al 1% de peptona

Disolver un gramo de digerido péptico de tejido animal en 1000mL de agua destilada, filtrar y ajustar el pH a 7.1±0.2, Distribuir en envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.

Solución II. Solución al 1% de peptona con polisorbato 80

Preparar la solución como se indica en I. Agregar 1mL de polisorbato 80 por cada litro de solución. Envasar y esterilizar.

Solución III. Solución al 0.85% de cloruro de sodio

Disolver 8.5g de cloruro de sodio en agua destilada y llevar al aforo a 1000mL; distribuir en envases conteniendo 100mL cada uno y esterilizar.

Solución IV. Solución de peptona y extracto de carne con polisorbato 80

Disolver los ingredientes en agua destilada, llevar al aforo a 1000mL, ajustar el pH, envasar y esterilizar.

Solución V. Solución de penicilinasa

Preparar la solución de penicilinasa y valorarla en unidades Levy. Esterilizar la solución de penicilinasa por filtración a través de membrana.

Solución VI. Meristato de isopropilo

Utilizar meristato de isopropilo esterilizado por filtración a través de membrana con pH del extracto acuoso de 5.5 o mayor. Determinar el pH del extracto acuoso y envasar en frascos estériles.

Como se puede observar es crítico que los medios estén estériles, lo que se hace mediante esterilización por calor húmedo en la mayoría de los casos, razón por la cual la autoclave debe estar funcionando correctamente, en ICLAB contamos con personal calificado y apto para realizar pruebas de calibración, ajuste y validación de esterilización por éste método.

Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB) es una empresa dedicada a la calibración de instrumentos de medición tales como: espectrofotómetros, potenciómetros,  viscosímetros, balanzas, básculas, manómetros, entre otros.

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El proceso de sacrificio

Cuando el animal está maduro y ha alcanzado su peso óptimo, está listo para el sacrificio. Una vez que llega a los corrales del matadero, debe reposar entre 8 a 24 horas en ayuno, sólo con agua antes del sacrificio. El reposo y ayuno es necesario para facilitar la eviseración, reduciendo las posibilidades de punción del tracto intestinal y contaminación de la canal. El animal es arreado hacia la nave principal mediante un pasillo angosto, pasa a un brete donde es golpeado en la frente mediante variados implementos mecánicos (martillo detonador o martillo neumático) cayendo inmediatamente aturdido al suelo. Es izado por las patas traseras, degollado y desengrado al inicio de la cadena de producción.

La sangre entera usualmente fluye hacia las cañerías formando parte de los efluentes , la sangre es un medio de cultivo poderoso para las bacterias que contaminan las aguas residuales del matadero, además de su mal olor al descomponerse en las lagunas de sedimentación y oxidación.

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Mencionamos a continuación las firmas que disponen de nuestros equipos en nuestro país y en el exterior, especificando el tipo de productos que se elaboran.

Ind. Quim. ALIMENTARIAS (ARGENTINA) - Ind. PROTEINICAS ARGENTINAS (ARGENTINA) - ENCOMIN (CHILE) - Frig. LA CATEDRAL (ARGENTINA) - PROTARGEN (ARGENTINA) - EMP. AGROIND. SAN ALBERTO (BOLIVIA) - Frig. VIVORATA (ARGENTINA) - Prod. NUTRIVEN (VENEZUELA) - Frig. MEATEX (ARGENTINA) - NUTRAL (SWIFT) (ARGENTINA) - CEVAL (BRASIL) - BOLIVAR INDUSTRIAS (ARGENTINA) - Frig. RIO SECO (ARGENTINA) - FRIGORIFICO DE OSORNO (CHILE) - Frig. VILLA OLGA (ARGENTINA) - QUICKFOOD (ARGENTINA) - Establec. COLONIA (URUGUAY) - GRANJA TRES ARROYOS (ARGENTINA) - Frig. PANDO (URUGUAY) - POLLOLIN (ARGENTINA) - Frig. LAS PIEDRAS (URUGUAY) - Frig. CAÑUELAS (ARGENTINA):

Estas Industrias elaboran Sangre entera en polvo o separada en Plasma y Hemoglobina en polvo.

RAFAEL CURLAT (Argentina): Elaboran Hígado de vacuno y Páncreas en polvo.

EMPAXPORT (Argentina): Elaboran Productos Opoterápicos en polvo.

BIORED (Chile): Elaboran Tauro Cólico (Bilis) en polvo.

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Yeruva y las proteinas de sangre bovina

En una década, Yeruvá SA, de Esperanza, llegó al liderazgo entre las empresas que obtienen proteínas a partir de la sangre bovina. Ahora decidió ingresar al negocio de la biotecnología y lanza nuevos productos para incrementar su participación en los mercados externos.

Cuando en 1975 Juan Miguel Requena decidió fundar Yeruvá SA, con una inversión cercana a 1,5 millones de dólares, fue imputado de utópico. "Parecía difícil recolectar la sangre bovina de las provincias de Santa Fe, Entre Ríos y el norte de Buenos Aires. Para ese entonces, nadie creía posible ir a buscar sangre a 600 kilómetros de distancia y regresar a la planta en Esperanza sin que se rompieran los glóbulos rojos".

Lo cuenta el mismo Requena, presidente de la compañía que actualmente lidera el mercado nacional en el procesamiento de sangre vacuna para la obtención de hemoglobina y plasma (proteína animal) a escala industrial.

Hoy la empresa procesa 3,5 millones de litros por mes, con capacidad instalada para llegar a los 5 millones de litros. El ejecutivo declinó dar la facturación de la compañía, pero dijo que está creciendo a un ritmo de entre 50 y 60 por ciento interanual y que, desde el año próximo, ya no dialogará con los gerentes regionales de los bancos, sino con los oficiales de negocios de esas instituciones.

Los primeros pasos

El conocimiento de Requena sobre el negocio se remonta a la experiencia familiar. En los años 60, su padre inició en el interior de Córdoba la recolección, en los frigoríficos de su zona, de las partes no comercializadas que quedaban luego de la faena de bovinos. Esos desperdicios se arrojaban al descampado y a cielo abierto, con la evidente contaminación que eso acarreaba.

"El negocio funcionó, sobre todo porque en esos años comenzó la explotación intensiva de pollos en criaderos, que demandaban alimentos balanceados. Nosotros les proveíamos harina de carne", apuntó.

Pero más tarde llegó la época del recordado ministro José Alfredo Martínez de Hoz y la empresa familiar se fue a pique. Sin embargo, para Requena, los malos tiempos dejaron un aprendizaje.

"Aprendí que sólo sobreviven las empresas ágiles y dinámicas, lo que para mí es un concepto clave. Las empresas no son grandes o chicas; las empresas son ágiles o lentas. Otro concepto muy claro es que no hay quedarse en lo mismo: se deben desarrollar permanentemente cosas nuevas para seguir creciendo", subrayó.

El liderazgo de Yeruva

Cuando un empresario dice que su empresa es líder en el rubro, debe demostrarlo. La argumentación del CEO de Yeruvá es la siguiente: "En la Argentina se faena aproximadamente 1 millón de animales por mes. Nosotros manejamos -mediante 76 frigoríficos proveedores- aproximadamente 400 mil animales mensuales. La sangre de los otros 600 mil no siempre es recuperable, porque los frigoríficos son muy pequeños o faenan en lugares muy alejados. De modo que quedan aproximadamente otros 400 mil animales. Ese resto se reparte entre nuestros 2 principales competidores y otros de menor tamaño".

Otro dato es que la compañía, aparte de su establecimiento central en Esperanza, tiene plantas procesadoras en Capitán Bermúdez (Santa Fe) y General Pico (La Pampa), además de una planta recolectora en Río Cuatro (Córdoba). En total produce unas 650 toneladas mensuales, de las cuales 70 por ciento corresponde a hemoglobina y 30 por ciento, a plasma.

La biotecnología de la sangre vacuna

Hasta ahora, el negocio central de la empresa fue el procesamiento de sangre vacuna que, una vez separada en hemoglobina y plasma, se deshidrata y transforma en polvo, utilizado por la industria alimentaria, fármaco-química y de nutrición animal. El paso siguiente y en pleno desarrollo, con una nueva planta que se construye en Esperanza, es entrar de lleno al negocio biotecnológico.

"Queremos recombinar los productos alimenticios y funcionales que se extraen del `quinto cuarto de la vaca' (aquellas partes con escaso o nulo valor comercial) con otros que son prácticamente medicinales, agregando algunos derivados de la leche, que también ocasionan problemas de efluentes. Es el caso de los sueros (sobrante tras la elaboración de quesos), que hoy se desechan o se elaboran a medias", explicó.

No es fácil sintetizar el nuevo objetivo por su complejidad técnica. Pero, de una manera simple, puede enunciarse como la preparación de productos semielaborados que contengan proteínas, energía y oligoelementos (cobre, hierro, zinc u otros minerales), que pueden combinarse de distintas maneras para el consumo humano.

Una década después de fundar la compañía, Requena vuelve a tener una idea que algunos calificarían de utópica. "Hay sitios en la Argentina -dice- cuyos habitantes viven marginados y subalimentados. No podemos llevarles carne ni vegetales. Pero sí podríamos llevarles un sobre con polvos, que pueden durar más de un año sin cadena de frío, con todos los nutrientes necesarios, para mezclar con sus comidas habituales".

Es obvio que la distribución de esos sobres no puede asumirla el sector privado.

Exportación de la mezcla de plasma y los derivados lácteos

Mas allá de la preocupación social, el ingreso al rubro biotecnológico abre nuevos horizontes exportadores. Hoy por hoy, de las 650 toneladas mensuales que produce Yeruvá, 350 van a mercados de Sudamérica, África y Asia, mientras los de Rusia y Holanda están en etapa de exploración.

Desde enero, la empresa comenzó a exportar nuevos productos: una mezcla de plasma y derivados de la leche (Plasmalac), una combinación de hemoglobina y derivados lácteos (Hemolac) y una composición que se obtiene de la molienda húmeda del maíz y la sangre bovina, llamada Yerumaíz.

"Estamos trabajando con peptonas (medicamentos biológicos preparados a partir de tejidos orgánicos específicos de vacunos), a punto de sacar la inmunoglobulina y a corto plazo tendremos listas recombinaciones con productos lácteos únicos en el mundo. Los nuevos productos están pensados para la exportación; el mercado doméstico aún no está maduro para ellos", concluyó.

Internacionalmente, los precios de la hemoglobina (53 centavos de dólar por kilo) y del plasma (entre 3,5 y 4 dólares) no son malos y Yeruvá exporta ligeramente por encima de esos valores. Pero la empresa alzó la guardia.

"Nuestros precios, tanto externos como internos, están dados por ser commodities, tanto el plasma como la hemoglobina. Son proteínas que compiten con la de la soja, aunque nuestros procesos no tengan nada que ver con la proteína de la soja", dice Requena.

En tanto, un estudio de la compañía prevé que en el mediano plazo las curvas de facturación y de costos internos se aproximen más de lo razonable. El motivo es el incremento de costos salariales y los ajustes inevitables en las tarifas de gas, electricidad y otros servicios.

"Si esperamos que esa variable se produzca, sin reaccionar, podemos quedar fuera de los mercados internos y externos. Por eso, ahora el esfuerzo es no depender de las líneas de commodities, máxime si tenemos en cuenta que 70 por ciento de nuestra producción es de hemoglobina, que tiene los precios más bajos".

La estrategia, entonces, es desarrollar nuevos productos con mayor valor agregado, destinados a la exportación. En términos económicos, esas nuevas líneas deben mostrar una media de facturación que esté por encima de los valores promedios del plasma. Esto permitirá absorber con mayor eficiencia el incremento de costos internos.

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