Efecto de la contaminación orgánica sobre las técnicas de análisis de HPLC y LC acopladas

¿Qué son las técnicas acopladas? ¿Cómo obtener la pureza del disolvente en análisis de HPLC y LC? ¿Qué problemas generan las impurezas orgánicas en la fase móvil ¿Cómo lograr la reducción de la contaminación orgánica?

Tema: Efecto de la contaminación orgánica sobre las técnicas de análisis de HPLC y LC acopladas

Fecha:15-Jul-2010 Fuente:QuimiNet Sectores relacionados:Alimenticia, Cosmética, Farmacéutica, Material y Equipo de Laboratorio

Foto por: © Getty Images

Análisis químico

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¿Qué son las técnicas acopladas?

El término “técnicas acopladas” se refiere comúnmente a la combinación de dos o más técnicas utilizadas para aumentar la capacidad de un método analítico, tal como LC-MS (Figura 1).

La cromatografía de fase reversa, combinada con la detección UV, es una de las técnicas de separación más ampliamente utilizada en la cromatografía líquida. Para lograr separaciones óptimas es importante asegurarse de la calidad de la fase móvil, puesto que los cambios en las condiciones de la fase móvil modifican las características de adsorción de las columnas cromatográficas.

Pureza del disolvente en análisis de HPLC y LC

En el análisis de HPLC y LC, la calidad y pureza de los disolventes utilizados son muy importantes, puesto que estos reactivos están presentes a lo largo del experimento. Existen actualmente varios disolventes para grado HPLC. Estos grados indican que los disolventes están especialmente preparados para obtener un ruido de fondo muy bajo con detección UV. La mayoría de los componentes orgánicos son visibles en un espectro de UV. En longitudes de onda mayores de 240 nm, la interferencia del disolvente es menos crítica que en la región entre 190-230 nm, donde cada impureza ínfima es visible con detección UV.

La detección, identificación y cuantificación de los componentes estudiados dependen de los límites de detección alcanzados y consecuentemente de la línea base de los análisis. La figura 2 muestra una comparación de la línea base de HPLC de varias fuentes de agua, incluyendo agua embotellada “grado HPLC”. Este estudio muestra claramente el efecto perjudicial que tiene sobre la calidad del agua su almacenamiento en botellas de vidrio y polietileno.

El agua ultrapura es un reactivo multipropósito, utilizado para el lavado de las cadenas de LC, la dilución y preparación de blancos y muestras y, finalmente, para la elusión. La calidad del agua ultrapura utilizada es por tanto fundamental, los contaminantes orgánicos, en particular, deben ser eliminados con especial cuidado, puesto que interfiere con la línea base (figura 3) y por tanto con los límites de detección y con la identificación del pico.

Impurezas orgánicas en la fase móvil

La presencia de impurezas orgánicas en la fase móvil y especialmente en la utilización de agua purificada para HPLC y LC , técnicas acopladas, da lugar a varios problemas.

Los contaminantes orgánicos generan picos durante el paso del gradiente, dando lugar a problemas en la identificación y en la cuantificación de los picos.
Estas impurezas contaminan las columnas y reducen el tiempo de vida de la misma.
Las soluciones patrón preparadas con agua que tiene impurezas dan lugar a resultados imprecisos en la identificación y en la cuantificación de muestras.
Las impurezas pueden afectar a las técnicas de detección acopladas a LC y llevar a resultados erróneos.

Reducción de la contaminación orgánica

Para obtener agua ultrapura que contenga la menor contaminación orgánica posible es necesario utilizar una combinación de tecnologías a lo largo de la cadena de purificación de agua desde la red hasta el agua ultrapura. En particular:

La foto-oxidación por rayos UV de compuestos orgánicos para la eliminación del COT hasta niveles de ppb, utilizando una lámpara de UV de longitud de onda doble (185 + 254 nm) integrada en una carcasa de acero inoxidable.

La vigilancia en línea del COT en el punto de uso del sistema de agua ultrapura para asegurar la calidad del agua, especialmente importante, puesto que puede haber presentes en el agua ultrapura, contaminantes orgánicos que no afecten a las mediciones de resistividad.

El agua purificada es importante para todos los sectores de laboratorio, desde la química orgánica e inorgánica, hasta la biología molecular y las aplicaciones de ciencias de la vida.

Los instrumentos y equipos de laboratorio son cada vez más sofisticados y sensibles, permitiendo que se alcancen límites de detección analítica de ng/L (niveles de ppt) de manera rutinaria e incluso de pg/L (niveles de ppq) en condiciones de salas limpias.

Millipore se encuentra en constante esfuerzo por desarrollar permanentemente nuevas tecnologías para satisfacer cada vez mejor dichos requisitos. Más concretamente, realizan experimentos regularmente con toda una variedad de instrumentos y equipos utilizados en los laboratorios de sus clientes a fin de disponer de conocimientos actualizados sobre los problemas reales que se encuentran en una amplia gama de aplicaciones. Esto nos permite desarrollar sistemas de purificación de agua que responden a estas necesidades específicas. También trabajan junto con algunos laboratorios suministrando asistencia directa y apoyo para sus aplicaciones.